Plásmido CRISPR de Activación (h) casein kinase IIα′: sc-401148-ACT

CSNK2A2 codifica la subunidad catalítica alfa′ de la caseína quinasa II (CK2), una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa que se asocia con subunidades beta reguladoras para formar el holoenzima CK2. CK2 fosforila un amplio espectro de sustratos implicados en la organización de la cromatina, la transcripción y el procesamiento de ARN, la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN, integrando señales a través de vías como Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K/AKT y MAPK. Mediante estas funciones a nivel de red, CSNK2A2 contribuye a la regulación de la proliferación, la adaptación al estrés y la apoptosis, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la señalización oncogénica, los procesos del neurodesarrollo y la modulación de vías inflamatorias. La actividad desregulada de CK2 y la expresión alterada de CSNK2A2 se han asociado con la biología tumoral, programas de fosforilación aberrantes y una homeostasis celular perturbada en múltiples contextos de enfermedad.

casein kinase IIα′ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSNK2A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

casein kinase IIα′ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSNK2A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSNK2A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de casein kinase IIα′. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSNK2A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de casein kinase IIα′ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía casein kinase IIα′ en células tumorales con expresión de CSNK2A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.