CARD 11 Plasmide Double Nickase (h): sc-402770-NIC

Il gene umano **CARD11** (CARD11/CARMA1) codifica una proteina scaffold che collega la segnalazione dei recettori dell’antigene all’attivazione a valle delle vie **NF-κB**, **JNK** e **mTOR**, integrando i segnali necessari per l’attivazione, la proliferazione dei linfociti e la produzione di citochine. In seguito alla stimolazione, CARD11 partecipa all’assemblaggio del complesso **CBM** (CARD11–BCL10–MALT1) per promuovere l’attivazione di **IKK** e programmi trascrizionali che controllano le risposte immunitarie. Una segnalazione di CARD11 deregolata è associata a un’alterata omeostasi immunitaria, inclusi fenotipi di immunodeficienza e linfoproliferazione, e perturbazioni ricorrenti di questa via sono osservate in alcune neoplasie delle cellule B e T. In quanto nodo centrale nella segnalazione prossimale al recettore, CARD11 è ampiamente studiato per chiarire i meccanismi di trasduzione del segnale, la regolazione trascrizionale e le decisioni di destino delle cellule immunitarie.

CARD 11 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CARD11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CARD11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CARD11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CARD11 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.