Plasmide CRISPR d'Activation (h) CAP1: sc-405060-ACT

La CAP1 humaine (cyclase-associated protein 1) est un régulateur du renouvellement de l’actine qui se lie aux monomères d’actine et coopère avec la cofiline pour favoriser le remodelage du cytosquelette. En modulant la dynamique de l’actine, CAP1 influence la forme cellulaire, l’adhérence, la migration et l’endocytose, ce qui la relie aux sorties de signalisation des GTPases de la famille Rho et aux voies associées aux adhérences focales. La réorganisation de l’actine dépendante de CAP1 affecte des processus tels que le trafic membranaire et la mécanotransduction, fréquemment altérés dans la biologie tumorale et les phénotypes invasifs. Une expression ou une activité dérégulée de CAP1 a été associée à des programmes de motilité aberrants et à des réponses au stress modifiées dans de multiples contextes cellulaires pertinents pour les maladies.

CAP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CAP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CAP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CAP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CAP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.