CaM II CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400952-ACT

ヒトCALM2はカルモジュリン（CaM II）をコードしており、カルモジュリンは広く発現するCa2+センサーとして、細胞内カルシウム濃度の一過性変化を、数多くの酵素、イオンチャネル、転写制御因子に結合してそれらを調節することで制御シグナルへと変換します。Ca2+/カルモジュリン依存性シグナル伝達を介して、興奮収縮連関、シナプス可塑性、細胞周期制御、刺激依存的な遺伝子発現などの過程に寄与し、CaMKシグナル、カルシニューリン/NFATの活性化、GPCRにより開始されるCa2+動態といった経路とも交差します。CALM2によるCa2+シグナルの緩衝および解読は、ミトコンドリア機能と膜興奮性を支え、下流のリン酸化ネットワークやカルシウム恒常性の形成に関与します。カルモジュリンシグナルの破綻や病原性CALM2バリアントは、不整脈を伴う表現型や、より広範な神経・心臓機能障害と関連づけられており、CALM2はカルシウム駆動性の疾患生物学を機序的に研究するうえで重要な標的となっています。

CaM II CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CALM2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CaM II CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CALM2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCALM2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CaM IIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCALM2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCaM II依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCALM2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCaM II経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。