Plasmide Double Nickase (h) calsequestrin 1: sc-403375-NIC

CASQ1 code la calséquestrine 1, une protéine à forte capacité de liaison au Ca²⁺ localisée dans la lumière du réticulum sarcoplasmique du muscle squelettique, où elle tamponne le Ca²⁺ et contribue à façonner le couplage excitation–contraction. En modulant la disponibilité luminale du Ca²⁺ et la cinétique de libération du Ca²⁺ par le récepteur à la ryanodine (RYR1), la calséquestrine 1 participe à l’homéostasie du Ca²⁺ et à la coordination des cycles de contraction/relaxation musculaires. Une altération de la fonction ou de l’expression de CASQ1 peut perturber la signalisation intracellulaire du Ca²⁺ et les réponses au stress associées à une libération anormale de Ca²⁺, à une contractilité diminuée et à une susceptibilité à des phénotypes de dysfonction musculaire. En tant que nœud central de la gestion du Ca²⁺ par le réticulum sarcoplasmique, CASQ1 est pertinent pour des études mécanistiques sur la signalisation dépendante du Ca²⁺, la protéostasie et le remodelage métabolique dans les fibres musculaires.

calsequestrin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASQ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASQ1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASQ1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASQ1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.