calsequestrin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403375

Visão geral

CASQ1 codifica a calsequestrina 1, uma proteína de alta capacidade de ligação a Ca²⁺ localizada no lúmen do retículo sarcoplasmático em músculo esquelético, onde atua como tampão de Ca²⁺ e ajuda a moldar o acoplamento excitação–contração. Ao interagir com complexos do receptor de rianodina e componentes da porção juncional do retículo sarcoplasmático, o CASQ1 sustenta a dinâmica de liberação e recaptação de Ca²⁺ que governa a contratilidade, a resistência à fadiga e a homeostase das fibras musculares. A perturbação do manejo de Ca²⁺ dependente de CASQ1 está associada a alterações na sinalização intracelular de Ca²⁺, em respostas ao estresse oxidativo e na remodelação da arquitetura do retículo sarcoplasmático. Estudos genéticos e funcionais implicaram o CASQ1 na suscetibilidade a fenótipos semelhantes à hipertermia maligna e a outros distúrbios do músculo esquelético caracterizados por armazenamento de Ca²⁺ prejudicado e liberação de Ca²⁺ desregulada.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO calsequestrin 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CASQ1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CASQ1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CASQ1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína calsequestrin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CASQ1 para a investigação da sinalização de calsequestrin 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CASQ1 críticos para a função calsequestrin 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CASQ1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo calsequestrin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo calsequestrin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CASQ1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo calsequestrin 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR calsequestrin 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CASQ1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CASQ1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.