CALML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400954

Übersicht

CALML3 kodiert Calmodulin-like 3, ein EF-Hand-Calciumbindungsprotein, das als Calciumsensor fungiert und calmodulinabhängige Signalwege kontextabhängig moduliert. CALML3 ist in epithelialen Geweben angereichert und wurde mit der Regulation der Zytoskelettorganisation, der Membrandynamik und von Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, indem es über calciumgetriebene Kontrolle von Kinase- und Phosphataseaktivitäten wirkt. Durch die Kopplung intrazellulärer Ca²⁺-Flüsse an nachgeschaltete Effektoren kann CALML3 Prozesse wie Zelladhäsion, Motilität und barrierebezogenes Remodelling beeinflussen. Veränderte CALML3-Expressionsmuster wurden in der epithelialen Pathobiologie und bei krebsassoziierten Phänotypen beschrieben, was seine Untersuchung im Kontext von Signalweg-Neuverschaltungen und zellulären Zustandsübergängen unterstützt.

Das CALML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CALML3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CALML3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CALML3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CALML3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CALML3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CALML3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CALML3-Exone abzielen, die für die CALML3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CALML3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CALML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CALML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CALML3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CALML3 HDR-Plasmid (h) und CALML3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CALML3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CALML3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.