CALML3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400954

Panoramica

CALML3 codifica la calmodulina-like 3, una proteina legante il calcio di tipo EF-hand che funge da sensore del calcio, modulando in modo dipendente dal contesto la segnalazione mediata dalla calmodulina. CALML3 è arricchita nei tessuti epiteliali ed è stata associata alla regolazione dell’organizzazione del citoscheletro, della dinamica di membrana e dei programmi di differenziamento attraverso il controllo, guidato dal calcio, dell’attività di chinasi e fosfatasi. Collegando i flussi intracellulari di Ca²⁺ agli effettori a valle, CALML3 può influenzare processi quali adesione cellulare, motilità e rimodellamento correlato alla funzione di barriera. Pattern di espressione alterati di CALML3 sono stati riportati nella patobiologia epiteliale e in fenotipi associati al cancro, supportandone lo studio nel rimodellamento delle reti di segnalazione e nelle transizioni di stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CALML3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CALML3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CALML3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CALML3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CALML3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CALML3 per lo studio della segnalazione di CALML3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CALML3 critici per la funzione di CALML3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CALML3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CALML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CALML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CALML3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CALML3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CALML3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CALML3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CALML3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.