CALML3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400954-ACT

O CALML3 humano (calmodulina-símile 3) codifica uma proteína EF-hand ligante de cálcio que atua como sensor de cálcio e modulador da sinalização dependente de cálcio, influenciando interações proteína–proteína e a regulação subsequente de quinases e do citoesqueleto. A expressão de CALML3 é enriquecida em contextos epiteliais e tem sido associada a programas de diferenciação, organização de junções celulares e processos de remodelamento regulados por cálcio. Por meio da integração com redes mais amplas de sinalização de Ca2+, o CALML3 pode impactar respostas transcricionais e a adaptação celular ao estresse. Sinalização de cálcio desregulada e padrões alterados de expressão de CALML3 foram relatados em estudos de transformação epitelial e biologia tumoral, sustentando seu valor como alvo de pesquisa em transições de estado celular relevantes para doenças.

CALML3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CALML3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CALML3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CALML3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CALML3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CALML3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CALML3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CALML3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CALML3 em células tumorais com expressão de CALML3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.