Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cacna2d2 (m): sc-425312

Présentation

Cacna2d2 code la sous-unité auxiliaire α2δ-2 des canaux calciques voltage-dépendants, un régulateur majeur du trafic des canaux, de leur expression membranaire et de leurs propriétés biophysiques, qui déterminent l’influx de calcium lors de l’excitabilité neuronale et de la transmission synaptique. En modulant la fonction des canaux CaV, CACNA2D2 influence la signalisation dépendante de l’activité, la libération de neurotransmetteurs et les programmes d’expression génique dépendants du calcium qui affectent le développement et la plasticité des circuits. Des altérations génétiques et fonctionnelles des sous-unités α2δ ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques, Cacna2d2 étant plus particulièrement lié à la fonction cérébelleuse et aux voies de coordination motrice. Ces caractéristiques font de Cacna2d2 une cible utile pour disséquer les mécanismes accessoires des canaux calciques en neurobiologie et dans des modèles de maladies axés sur l’électrophysiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cacna2d2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cacna2d2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cacna2d2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cacna2d2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cacna2d2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cacna2d2 pour l'étude de la signalisation de Cacna2d2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cacna2d2 essentiels à la fonction de Cacna2d2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cacna2d2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cacna2d2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cacna2d2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cacna2d2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cacna2d2 plasmide HDR (m) et le Cacna2d2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cacna2d2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cacna2d2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.