Plasmide Double Nickase (h) C3G: sc-401616-NIC

RAPGEF1 code pour C3G, un facteur d’échange de nucléotides de guanine (GEF) qui active Rap1 et d’autres petites GTPases apparentées afin de coordonner l’adhésion dépendante des intégrines, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire. Par le recrutement médié par des adaptateurs en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs immunitaires, C3G contribue à relier des signaux extracellulaires aux voies MAPK et Rap1, qui influencent la prolifération, la différenciation et le trafic vésiculaire. Dans des contextes hématopoïétiques et épithéliaux, des perturbations de RAPGEF1 ont été associées à une dynamique modifiée des jonctions cellule–cellule et à des réseaux de signalisation dérégulés, pertinents pour la transformation oncogénique et la fonction des cellules immunitaires. En tant que nœud de voie reliant la phosphorylation sur tyrosine à des réponses pilotées par Rap, C3G est fréquemment étudiée dans des modèles d’invasion, d’activation des leucocytes et de plasticité de la signalisation induite par les récepteurs.

C3G Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAPGEF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAPGEF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAPGEF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAPGEF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.