C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421835

概要

Ncl は C23（ヌクレオリン）をコードしており、ヌクレオリンは豊富に存在する核小体リン酸化タンパク質として、rRNA の転写、pre-rRNA のプロセシング、リボソームの組み立てを協調的に制御し、全体的なプロテオスタシスと細胞増殖を支えます。ヌクレオリンはまた、核・細胞質・細胞表面の間をシャトル移行して、クロマチン構造の制御、DNA 損傷応答、mRNA の安定性、ならびにストレス適応に関連するシグナル出力に影響を与えます。RNA ポリメラーゼ I の装置、リボ核タンパク質複合体、主要な細胞周期制御因子との相互作用を通じて、C23 は核小体機能を増殖およびアポトーシス経路と統合します。ヌクレオリンの発現量や局在の異常は、リボソーム生合成の変調、異常な翻訳プログラム、腫瘍性表現型と関連づけられており、腫瘍生物学や細胞ストレス研究で頻繁に注目される標的となっています。

C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNcl遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ncl内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nclのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C23 (Nucleolin)タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C23 (Nucleolin)シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ncl欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C23 (Nucleolin)の機能に不可欠なNclエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nclゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびC23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ncl遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C23 (Nucleolin) HDRプラスミド（m）および C23 (Nucleolin) HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNclホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNcl標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。