C2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419389

Panoramica

Il componente del complemento 2 (C2) è uno zimogeno centrale di serin-proteasi delle vie classica e lectinica del complemento nel topo; viene scisso da C1s o MASP2 per generare C2a e formare la convertasi di C3 (C4b2a). Questo passaggio promuove l’amplificazione dell’attivazione del complemento, l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e, a valle, la formazione del complesso di attacco alla membrana, collegando il riconoscimento immunitario innato alla rimozione di immunocomplessi e patogeni. L’attività di C2 interagisce con le reti citochiniche e con le risposte dipendenti dai recettori Fc, modulando il reclutamento dei leucociti e la presentazione dell’antigene nei tessuti immunitari. Un’alterazione della funzione di C2 è ampiamente rilevante per studi sulla disregolazione del complemento associata ad autoimmunità, suscettibilità alle infezioni e meccanismi di danno tissutale infiammatorio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C2 per lo studio della segnalazione di C2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C2 critici per la funzione di C2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.