Plasmide CRISPR/Cas9 KO C2 (m): sc-419389

Présentation

Le composant 2 du complément (C2) est un zymogène de sérine protéase central des voies classique et des lectines du complément chez la souris. Il est clivé par C1s ou MASP2 pour générer C2a et former la C3 convertase (C4b2a). Cette étape entraîne l’amplification de l’activation du complément, l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et, en aval, la formation du complexe d’attaque membranaire, reliant la reconnaissance immunitaire innée à l’élimination des complexes immuns et des agents pathogènes. L’activité de C2 interagit avec les réseaux de cytokines et les réponses dépendantes des récepteurs Fc, modulant le recrutement des leucocytes et la présentation de l’antigène dans les tissus immunitaires. Une fonction altérée de C2 est largement pertinente pour les études sur la dérégulation du complément associée à l’auto-immunité, à la susceptibilité aux infections et aux mécanismes de lésion tissulaire inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C2 pour l'étude de la signalisation de C2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C2 essentiels à la fonction de C2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus C2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C2 plasmide HDR (m) et le C2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.