Plásmido Doble Nickase (h) C1orf85: sc-414006-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)C1orf85 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa C1orf85 (h) y el plásmido de doble nickasa C1orf85 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GLMP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) C1orf85 | sc-414006-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) C1orf85 | sc-414006-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLMP codifica C1orf85, una glicoproteína asociada a la membrana lisosomal y endolisosomal implicada en el mantenimiento de la integridad del lisosoma y en el soporte del tráfico y el recambio normales de macromoléculas. Estudios funcionales vinculan GLMP con la homeostasis lisosomal, la estabilidad de proteínas de membrana y las respuestas celulares al estrés metabólico, en consonancia con funciones en las vías de autofagia-lisosoma y el catabolismo intracelular. La alteración de GLMP se ha asociado con fenotipos de disfunción lisosomal y se ha investigado en el contexto de patología metabólica y hepática, donde un procesamiento lisosomal deficiente puede contribuir al daño celular. En consecuencia, GLMP/C1orf85 es una diana útil para analizar cómo el control de calidad dependiente del lisosoma influye en la inflamación, la proteostasis y la comunicación entre orgánulos en células humanas.
C1orf85 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLMP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLMP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLMP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLMP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.