C1orf115 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413237-ACT

C1orf115 (umano) codifica una proteina scarsamente caratterizzata, con un’annotazione funzionale limitata, il che suggerisce ruoli potenzialmente dipendenti dal contesto e chiaribili al meglio tramite studi di perturbazione. I dataset disponibili di trascrittomica e proteomica indicano pattern di espressione specifici per tipo cellulare, a supporto di indagini sulla differenziazione di linea, su programmi di adattamento allo stress o su altri stati cellulari regolati. Poiché i collegamenti meccanicistici con le vie di segnalazione canoniche restano definiti solo in parte, la modulazione dell’espressione di C1orf115 è utile per mappare le risposte trascrizionali a valle e le reti di interazione proteica. Le firme di espressione alterate di open reading frame non caratterizzati come C1orf115 vengono frequentemente esaminate in dataset di oncologia e neurobiologia, rendendolo rilevante per studi esplorativi su vie associate a malattia, senza presupporre un nesso causale.

C1orf115 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1orf115 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1orf115 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1orf115 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1orf115, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1orf115. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1orf115 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1orf115 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1orf115 nelle cellule tumorali con espressione di C1orf115 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.