C/EBP beta CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400125-ACT

CEBPB は転写因子 C/EBPβ をコードしており、炎症、自然免疫シグナル伝達、細胞周期の進行、細胞分化を制御する刺激応答性の遺伝子プログラムを調節する塩基性ロイシンジッパー（bZIP）タンパク質である。C/EBPβ は、NF-κB、JAK/STAT、MAPK シグナル伝達を含むサイトカイン経路やストレス経路からのシグナルを統合し、マクロファージ活性化、脂肪細胞分化（アディポジェネシス）、上皮細胞の可塑性を形作る転写出力を調節する。CEBPB 活性の変化は、炎症状態の制御不全やリモデリング過程と関連づけられており、代謝機能障害、線維化、がん原性の転写ネットワークといった文脈で頻繁に研究されている。これらの特性により、C/EBPβ は、細胞外シグナルが系譜および状況依存的な遺伝子発現プログラムへと変換される仕組みを解明するうえで中心的なノードとなる。

C/EBP beta CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CEBPBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C/EBP beta CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CEBPB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCEBPB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C/EBP betaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCEBPB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC/EBP beta依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCEBPB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC/EBP beta経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。