c-Abl Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418935

Descripción general

El gen Abl1 de ratón codifica la tirosina quinasa no receptora c-Abl, una proteína de señalización multifuncional que integra señales procedentes de receptores de factores de crecimiento, integrinas y estrés genotóxico para regular la proliferación, la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y la apoptosis. La actividad de c-Abl influye en vías que controlan la dinámica de la actina y el recambio de las adhesiones focales, y participa en la señalización de la respuesta al daño del ADN mediante interacciones proteína-proteína dependientes de fosforilación en el núcleo. La señalización desregulada de Abl1 y la actividad alterada de la quinasa c-Abl son ampliamente relevantes para la transformación oncogénica y programas aberrantes de supervivencia celular, lo que convierte a Abl1 en un nodo clave para estudiar redes de señalización impulsadas por quinasas. En modelos murinos, la alteración de Abl1 permite investigar mecanismos del desarrollo, la función de células inmunitarias y fenotipos de respuesta al estrés vinculados a la señalización por tirosina quinasas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO c-Abl (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Abl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Abl1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Abl1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína c-Abl.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Abl1 para la investigación de la señalización de c-Abl, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Abl1 críticos para la función de c-Abl
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Abl1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido c-Abl CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido c-Abl CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Abl1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR c-Abl (m) y el plásmido HDR c-Abl (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Abl1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Abl1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.