Plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD9 (m): sc-430581

Présentation

Le gène murin *Brd9* code BRD9, une protéine lectrice de la chromatine contenant un bromodomaine, qui reconnaît les marques d’acétylation des lysines sur les histones et contribue au remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP. BRD9 est un composant caractéristique des complexes BAF non canoniques (ncBAF/GBAF) et participe à la régulation des enhancers et des promoteurs, ainsi qu’à des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la spécification de lignée et l’identité cellulaire. Par ces fonctions épigénétiques, BRD9 influence des voies liées aux réponses aux dommages de l’ADN, au contrôle du cycle cellulaire et aux transitions d’état de différenciation. Un remodelage de la chromatine et des circuits transcriptionnels associés à BRD9 dérégulés ont été impliqués dans des contextes pertinents pour des dépendances oncogéniques et des phénotypes du développement, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Brd9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Brd9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Brd9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BRD9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Brd9 pour l'étude de la signalisation de BRD9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Brd9 essentiels à la fonction de BRD9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Brd9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BRD9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BRD9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Brd9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BRD9 plasmide HDR (m) et le BRD9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Brd9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Brd9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.