Plásmido CRISPR de Activación (m2) BMP-3: sc-430986-ACT-2

El gen murino Bmp3 codifica la proteína morfogenética ósea 3 (BMP-3), un ligando secretado de la superfamilia TGF-β que modula la osteogénesis y el patrón esquelético al influir en la señalización dependiente de SMAD y antagonizar vías osteoinductoras de BMP; BMP-3 es producida por los compartimentos óseo y estromal y contribuye a la regulación de la formación ósea, la deposición de matriz extracelular y la diferenciación de células del linaje mesenquimal, lo que la vincula con programas más amplios de homeostasis del cartílago y del hueso; la actividad alterada de Bmp3/BMP-3 se ha asociado con fenotipos relacionados con baja masa ósea, reparación deficiente de fracturas y desarrollo craneofacial anómalo, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en modelos de enfermedades musculoesqueléticas; la edición génica o la perturbación de Bmp3 en sistemas murinos permite investigar el crosstalk entre redes TGF-β/BMP, el compromiso de linaje y la remodelación tisular en investigación de biología del desarrollo y biología esquelética.

BMP-3 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bmp3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMP-3 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bmp3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bmp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMP-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bmp3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMP-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMP-3 en células tumorales con expresión de Bmp3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.