Date published: 2026-8-26

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Bmi-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419338

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Datenblätter
  • Zielspezies: mouse
  • 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
  • Bmi-1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
  • gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Bmi-1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
  • Bmi-1 HDR-Plasmid (m) (sc-419338-HDR) wird für die Co-Transfektion mit dem Bmi-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) empfohlen, um die Selektion erfolgreich editierter Zellen durch HDR-vermittelte Integration einer Puromycin-Resistenzkassette und eines RFP-Reportergens zu ermöglichen
  • Das Bmi-1 HDR-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes eine HDR-Matrize (Homology-Directed Repair) enthält, die den gRNA-Zielstellen im Bmi-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) entspricht
  • Jedes HDR-Plasmid enthält zwei ~800 bp lange Homologiearme, die die Puromycin-Resistenz- und RFP-Kassetten flankieren und so konzipiert sind, dass sie an genomische DNA-Sequenzen binden, die die durch Cas9 induzierte Doppelstrangbruchstelle umgeben, und eine präzise HDR-vermittelte Integration ermöglichen
  • Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
  • Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Bmi-1: sc-13519
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    ProduktKatalog #EINHEITPreisANZAHLFavoriten

    Bmi-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m)

    sc-419338
    20 µg
    $397.00

    Bmi-1 HDR Plasmid (m)

    sc-419338-HDR
    20 µg
    $445.00

    Übersicht

    Bmi1 codiert für Bmi-1, einen Transkriptionsrepressor der Polycomb-Gruppe, der innerhalb von PRC1 wirkt, um die Chromatinkondensation und eine stabile Genstilllegung aufrechtzuerhalten. In Mauszellen reguliert Bmi-1 Programme der Selbsterneuerung und Differenzierung, indem es den Cdkn2a-Lokus (p16Ink4a/p19Arf) sowie weitere Zielgene des Zellzyklus und der Seneszenz reprimiert und so mit Stammzellerhalt und proliferativer Kapazität verknüpft ist. Die Bmi-1-Aktivität überschneidet sich mit der epigenetischen Kontrolle von DNA-Schadensantworten und Signalwegen des oxidativen Stresses und beeinflusst dadurch die Biologie hämatopoetischer und neuraler Stammzellen. Eine fehlregulierte BMI1-Expression wurde mit veränderter Proliferation, beeinträchtigter Differenzierung und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung epigenetischer Kontrolle in krankheitsrelevanten Modellen macht.

    Bmi-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Bmi1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid im Pool koexprimiert eine einzigartige sgRNA, die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Bmi1-Lokus abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease, und kodiert für GFP, um die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen zu ermöglichen. Diese Multi-Guide-Strategie erhöht die Wahrscheinlichkeit, Frameshifts oder Deletionen zu induzieren, die zu einem funktionellen Knockout führen, und bietet damit eine robustere Alternative zu Single-Guide-Ansätzen. An mehreren Stellen induzierte DSBs werden durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) oder, bei Verwendung mit der enthaltenen HDR-Donor-Matrize, durch homologe Reparatur (HDR) an einer definierten Zielstelle innerhalb des Lokus repariert.

    Bei Verwendung in Verbindung mit dem RFP-exprimierenden HDR-Donor können GFP- und RFP-Fluoreszenz gemeinsam genutzt werden, um transfizierte von editierten Zellpopulationen zu unterscheiden, was die auf Durchflusszytometrie basierenden Sortier- und Klonauswahl-Workflows optimiert.

    Homology-Directed Repair (HDR)-Donor — Puromycin-Kassette mit RFP-Reporter

    Für Anwendungen, die bestätigte, selektierbare Knockout-Klone erfordern, enthält das Bmi-1 HDR-Plasmid (m) ein HDR-Donorkonstrukt mit einer Puromycin-Resistenzkassette (PuroR) und einem Reporter für rotes fluoreszierendes Protein (RFP), flankiert von Homologiearmen, die für eine definierte Bmi1 Zielstelle spezifisch sind.
    Bei Co-Transfektion mit dem Bmi-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m):

    • Die PuroR-RFP-Kassette integriert sich über HDR an der Cas9-Schnittstelle und unterbricht dabei das Bmi1 offene Lesegerüst.
      Die RFP-Fluoreszenz liefert einen unmittelbaren visuellen Hinweis auf eine erfolgreiche Integration und ermöglicht die fluoreszenzbasierte Identifizierung oder Sortierung editierter Zellen vor oder parallel zur Puromycin-Selektion.
      Erfolgreich editierte Zellen werden durch Puromycin-Resistenz bestätigt, was den Aufwand für das Klon-Screening erheblich reduziert.
      Diese Selektionsstrategie eignet sich ideal zur Erzeugung stabiler, klonaler KO-Zelllinien für nachgelagerte Funktionsstudien, Wirkstoffscreenings oder die Modellentwicklung.

    Cre-lox-Kassetten-Entfernungssystem

    Das HDR-Donorkonstrukt verfügt über loxP-Stellen, die die PuroR-RFP-Selektionskassette flankieren, um eine saubere Markerentfernung nach der Klonbestätigung zu ermöglichen. Die transiente Expression der Cre-Rekombinase über das enthaltene Cre-Vektor: sc-418923 schneidet die Kassette heraus, wobei eine minimale Rest-loxP-Stelle innerhalb des Bmi1-Lokus verbleibt und potenzielle Störeffekte auf nachgeschaltete Assays eliminiert werden.
    Dieser zweistufige Ansatz:

    • Minimiert Störungen der lokalen Chromatinarchitektur und benachbarter regulatorischer Elemente
      Stellt einen nahezu nativen genomischen Kontext am editierten Locus wieder her
      Ermöglicht die Wiederverwendung der Puromycin-Selektionsstrategie in derselben Zelllinie für weitere Editierungen

    Hauptmerkmale

    • gRNA, die auf Bmi1 Exon(e) abzielt, die für die Bmi-1 Funktion entscheidend sind
      Koexpression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid für eine vereinfachte Verabreichung
      HDR-Donor mit Puromycin-Resistenz für die positive Klonselektion
      loxP-flankierte PuroR-Kassette mit Cre-Rekombinase-Vektor für die nahtlose Markerentfernung
      Wird gebrauchsfertig für die Verabreichung durch Transfektion geliefert

    Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.