Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404411
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BLM hydrolase CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してBLM hydrolaseゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BLM hydrolase 抗体 (F-9): sc-166777
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-404411 | 20 µg | $397.00 |
概要
ヒトのBLMHは、細胞質に存在するシステイン型アミノペプチダーゼであるブレオマイシン加水分解酵素（bleomycin hydrolase）をコードしており、細胞内ペプチドのタンパク質分解的プロセシングや、タンパク質品質管理の維持に関与する。BLMHはアミノ酸のリサイクルに寄与し、ペプチドの回転（ターンオーバー）やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークへの作用を通じて、細胞ストレス応答との関連も示されている。BLMH活性の変化は、薬物代謝やブレオマイシン誘発性細胞毒性に対する感受性という文脈で研究されてきたほか、ペプチド除去経路が破綻する神経変性や炎症性の表現型との潜在的な関連についても検討されている。広く発現する酵素として、BLMHは、ペプチダーゼ依存的な恒常性が酸化ストレスや損傷応答シグナル伝達とどのように交差するかを調べるうえで有用な結節点となる。
BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBLMH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BLMH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BLMHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BLM hydrolaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、BLM hydrolaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BLMH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- BLM hydrolaseの機能に不可欠なBLMHエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、BLMHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBLM hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BLMH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
BLM hydrolase HDRプラスミド（h）および BLM hydrolase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBLMHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBLMH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。