BLM hydrolase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404411

Panoramica

BLMH umano codifica l’idrolasi della bleomicina, un’amminopeptidasi citosolica a cisteina coinvolta nell’elaborazione proteolitica dei peptidi intracellulari e nel mantenimento del controllo qualità delle proteine. BLMH partecipa al riciclo degli amminoacidi ed è stata collegata alle risposte cellulari allo stress attraverso effetti sul turnover dei peptidi e sulle reti di proteostasi. Un’attività alterata di BLMH è stata studiata in relazione al metabolismo dei farmaci e alla suscettibilità alla citotossicità indotta dalla bleomicina, ed è stata anche esplorata per potenziali connessioni con fenotipi neurodegenerativi e infiammatori in cui le vie di eliminazione dei peptidi risultano perturbate. Essendo un enzima ampiamente espresso, BLMH rappresenta un nodo utile per indagare come l’omeostasi dipendente dalle peptidasi si intrecci con lo stress ossidativo e con la segnalazione della risposta al danno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BLM hydrolase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BLMH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BLMH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BLMH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BLM hydrolase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BLMH per lo studio della segnalazione di BLM hydrolase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BLMH critici per la funzione di BLM hydrolase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BLMH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BLMH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BLM hydrolase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BLM hydrolase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BLMH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BLMH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.