Plasmide CRISPR/Cas9 KO BLM (m): sc-419336
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- BLM Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique BLM, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BLM Antibody (B-4): sc-365753
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO BLM (m) | sc-419336 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Blm code l’hélicase d’ADN BLM de la famille RecQ chez la souris, un facteur central du maintien de l’intégrité du génome qui limite la recombinaison homologue aberrante et contribue à la résolution des fourches de réplication bloquées. BLM agit en collaboration avec la topoisomérase IIIα, RMI1/2 et d’autres protéines de réparation pour traiter les intermédiaires de recombinaison, favoriser une réparation fidèle des cassures double brin de l’ADN et soutenir la progression en phase S. Par ses rôles dans les réponses au stress réplicatif, la stabilité des télomères et la signalisation des points de contrôle, BLM influence l’accumulation de mutations et les réarrangements chromosomiques. Une activité de BLM dérégulée est associée à une instabilité génomique accrue, phénomène largement pertinent pour l’étude de la biologie des cancers, de la signalisation des dommages à l’ADN et du maintien du génome lié au vieillissement.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BLM (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Blm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Blm, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Blm à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BLM.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Blm pour l'étude de la signalisation de BLM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Blm essentiels à la fonction de BLM
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Blm pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le BLM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BLM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Blm. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le BLM plasmide HDR (m) et le BLM (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Blm pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Blm définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.