Partículas Lentivirales de Activación (h) BID: sc-400510-LAC

BID humano (agonista de muerte con dominio de interacción BH3) codifica una proteína proapoptótica de la familia BCL-2 que conecta la señalización extrínseca de receptores de muerte con la permeabilización de la membrana externa mitocondrial. Tras la escisión por la caspasa-8 a BID truncado (tBID), promueve la activación de BAX/BAK, la liberación de citocromo c y las cascadas posteriores de caspasas, integrando la apoptosis con las respuestas celulares al estrés. La actividad de BID se cruza con las vías de TNF/Fas, el control de la integridad mitocondrial y la señalización inflamatoria, lo que la hace relevante para estudios sobre decisiones de destino celular, homeostasis inmunitaria y mecanismos de lesión tisular. La regulación alterada de la apoptosis mediada por BID se examina con frecuencia en biología del cáncer, neurodegeneración y modelos de enfermedad hepática en los que se ven perturbadas la señalización de supervivencia y el “priming” mitocondrial.

Las partículas de activación lentiviral BID (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BID en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BID (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BID, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BID. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BID y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.