betaKlotho Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401614-LAC

Il gene umano KLB codifica betaKlotho, un co-recettore transmembrana a singolo passaggio che conferisce specificità di ligando alla segnalazione endocrina degli FGF, in particolare FGF19/FGF15 e FGF21. Formando complessi recettoriali con i FGFR, betaKlotho regola programmi trascrizionali collegati a MAPK/ERK e PI3K/AKT che controllano l’omeostasi degli acidi biliari, il metabolismo dei lipidi e del glucosio e il bilancio energetico. L’espressione di KLB è arricchita in tessuti metabolici come fegato e tessuto adiposo, dove modella la segnalazione responsiva ai nutrienti e il crosstalk endocrino. Un’alterazione dell’attività o dell’espressione di betaKlotho è stata associata a disfunzioni metaboliche e alla biologia di patologie correlate, rendendo KLB un nodo chiave per studi meccanicistici delle vie epato-metaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale betaKlotho (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KLB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale betaKlotho (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KLB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di betaKlotho. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KLB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.