betaKlotho Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401614

Descripción general

KLB codifica betaKlotho, un correceptor transmembrana de paso único que confiere especificidad de ligando a los factores de crecimiento fibroblástico endocrinos, especialmente FGF19 y FGF21, mediante la formación de complejos con los FGFR. En tejidos humanos como el hígado y el tejido adiposo, la señalización dependiente de betaKlotho regula la activación de la vía MAPK/ERK y programas transcripcionales que controlan la homeostasis de los ácidos biliares, la utilización de lípidos, el metabolismo de la glucosa y el balance energético. La alteración de la expresión de KLB o de la función de betaKlotho se ha vinculado con la desregulación metabólica, incluidos fenotipos asociados a la obesidad, resistencia a la insulina y enfermedad del hígado graso no alcohólico, y puede modular la señalización de estrés e inflamatoria en células metabólicamente activas. Estas características convierten a KLB en un nodo útil para desentrañar las vías de FGF endocrinos y el diálogo metabólico específico de cada tejido.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO betaKlotho (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KLB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KLB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KLB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína betaKlotho.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KLB para la investigación de la señalización de betaKlotho, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KLB críticos para la función de betaKlotho
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KLB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido betaKlotho CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido betaKlotho CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KLB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR betaKlotho (h) y el plásmido HDR betaKlotho (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KLB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KLB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.