Plásmido CRISPR de Activación (h) β1-Syntrophin: sc-405993-ACT

SNTB1 codifica la β1-sintrofina, un adaptador del citoesqueleto dentro del complejo de proteínas asociadas a la distrofina que organiza (sirve de andamiaje para) proteínas de señalización en la membrana plasmática. A través de su dominio PDZ, la β1-sintrofina organiza microdominios que acoplan receptores de membrana y canales iónicos a estructuras ricas en actina, modelando procesos como la adhesión celular, la mecanotransducción y la transducción de señales en tejidos excitables y no excitables. Los complejos dependientes de SNTB1 influyen en vías vinculadas a la señalización del óxido nítrico y a la localización de canales, contribuyendo a la estabilidad de la membrana y a respuestas celulares reguladas. La desregulación de componentes del complejo de distrofina y de las redes de andamiaje asociadas se ha implicado en fenotipos neuromusculares y de miocardiopatía, lo que convierte a SNTB1 en un objetivo relevante para investigar la señalización de membrana asociada a enfermedad y la organización del citoesqueleto.

β1-Syntrophin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNTB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β1-Syntrophin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNTB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNTB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β1-Syntrophin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNTB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β1-Syntrophin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β1-Syntrophin en células tumorales con expresión de SNTB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.