Plasmide Double Nickase (m) beta Synuclein: sc-430508-NIC

Sncb code la bêta-synucléine, une protéine neuronale présynaptique associée aux vésicules synaptiques, qui module la libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique. Dans le cerveau de la souris, la bêta-synucléine participe à des voies régissant le trafic vésiculaire, la courbure membranaire et la protéostase, et peut influencer le comportement d’agrégation d’autres membres de la famille des synucléines. Des altérations de l’homéostasie des synucléines ont été associées à des mécanismes neurodégénératifs impliquant le mauvais repliement des protéines, des défauts de transport axonal et des dysfonctionnements synaptiques. Sncb est donc largement utilisé comme outil moléculaire pour analyser le maintien des synapses, les réponses neuronales au stress et les interactions au sein du réseau des synucléines in vivo et dans des neurones en culture.

beta Synuclein Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sncb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sncb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sncb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sncb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.