BDP1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422508-ACT

Ptpn18 kodiert eine Nichtrezeptor-Protein-Tyrosinphosphatase, die phosphorylierungsabhängige Signalübertragung und Protein-Protein-Interaktionen moduliert und dadurch die Outputs von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie nachgeschaltete Signalwege beeinflusst, die Zellwachstum, Differenzierung und die Organisation des Zytoskeletts prägen. Über seine Rolle bei der Feinabstimmung der Tyrosinphosphorylierung kann PTPN18 den endozytotischen Transport sowie die Rückkopplungskontrolle mitogener Signale beeinflussen – Prozesse, die in der Onkologie- und Neurobiologie-Forschung häufig untersucht werden. Eine dysregulierte Phosphataseaktivität und veränderte Dynamiken in RTK-Signalwegen werden häufig mit aberranter Proliferation, Migration und Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch Ptpn18 einen nützlichen Knotenpunkt für Pathway-Mapping-Studien in murinen Zellmodellen darstellt.

BDP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ptpn18-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BDP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ptpn18-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ptpn18-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BDP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ptpn18-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BDP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BDP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ptpn18-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.