BCMA Plasmide Double Nickase (h): sc-403058-NIC

TNFRSF17 codifica l’antigene di maturazione delle cellule B (BCMA), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso prevalentemente nelle cellule B in fase tardiva e nelle plasmacellule. BCMA lega APRIL e BAFF per attivare NF-κB e programmi di sopravvivenza correlati che sostengono il mantenimento delle cellule secernenti anticorpi, la produzione di immunoglobuline e la longevità delle plasmacellule all’interno della nicchia del midollo osseo. La deregolazione del segnale e dell’espressione di BCMA è strettamente associata a un’espansione anomala delle plasmacellule e a patologie della linea B, rendendolo un nodo chiave per lo studio dell’immunità umorale, della differenziazione delle cellule B e delle vie di sopravvivenza dipendenti dal microambiente. In quanto recettore di superficie con ligandi e effettori a valle ben definiti, BCMA rappresenta un bersaglio accessibile per indagare la segnalazione mediata da recettori e le risposte trascrizionali nelle cellule immunitarie umane.

BCMA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFRSF17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFRSF17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFRSF17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFRSF17 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.