BCAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429913-ACT

O gene murino Pik3ap1 codifica a BCAP (adaptador de células B para PI3K), um adaptador citoplasmático que conecta a sinalização de imunorreceptores à ativação da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K). A BCAP integra sinais a montante provenientes do receptor de células B e de receptores da imunidade inata com a via PI3K–AKT, moldando programas transcricionais a jusante que influenciam a ativação de linfócitos, a sobrevivência e a reprogramação metabólica. Por meio dessas funções, Pik3ap1 é usado para estudar a integração de sinais entre vias imunes, incluindo a comunicação cruzada com respostas dependentes de NF-κB e MAPK. A desregulação da arquitetura da via de PI3K e da propagação de sinais mediada por adaptadores é relevante em modelos de disfunção imune e inflamação, apoiando pesquisas mecanísticas em imunologia e sinalização de sistemas.

BCAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pik3ap1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BCAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pik3ap1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pik3ap1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BCAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pik3ap1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BCAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BCAP em células tumorais com expressão de Pik3ap1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.