BAT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403785-ACT

DDX39B codifica a BAT1, uma helicase de RNA dependente de ATP da família DEAD-box que participa do splicing de pré-mRNA, da exportação de mRNA e de aspectos mais amplos do metabolismo de RNA no núcleo. A BAT1 tem sido associada à regulação da sinalização inflamatória por meio da modulação da expressão de genes de citocinas e de interações com vias da imunidade inata, refletindo seu papel em coordenar os resultados transcricionais com o processamento de RNA. Por ser um gene localizado na região do MHC classe III, DDX39B tem sido estudado no contexto da variação genética relacionada ao sistema imune e da suscetibilidade a fenótipos inflamatórios e autoimunes. A desregulação de redes de processamento de RNA associadas à BAT1 pode influenciar programas de estado celular, como proliferação e respostas ao estresse, tornando-a relevante para estudos mecanísticos do controle da expressão gênica.

BAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDX39B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDX39B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDX39B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDX39B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAT1 em células tumorais com expressão de DDX39B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.