Partículas Lentivirales de Activación (h) B7-2: sc-418032-LAC

CD86 (B7-2) es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas de superficie celular con función coestimuladora, expresado principalmente en las células presentadoras de antígeno, donde se une a CD28 y CTLA-4 para modular la activación de las células T, la tolerancia y el equilibrio de los puntos de control inmunitarios. Al acoplar el reconocimiento del antígeno con la señalización coestimuladora, B7-2 influye en la actividad de las vías NF-κB, MAPK y PI3K/AKT aguas abajo, y modela la producción de citocinas y la diferenciación de las células T. Las alteraciones en la expresión de CD86 se han asociado con una activación inmunitaria desregulada y con programas de presentación de antígeno aberrantes observados en contextos de inflamación autoinmune, evasión inmunitaria tumoral e infección crónica. Estas propiedades hacen de CD86 una herramienta útil para desentrañar el diálogo entre APC y células T, la biología de los puntos de control y el control transcripcional de los componentes de la sinapsis inmunitaria.

Las partículas de activación lentiviral B7-2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CD86 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral B7-2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CD86, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de B7-2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CD86 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.