AVP Receptor V1a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401691-ACT

AVPR1Aは、ヒトのアルギニン・バソプレシン受容体1A（V1a）をコードしている。V1aは7回膜貫通型のGPCRで、主としてGq/11に共役し、ホスホリパーゼCの活性化、イノシトールリン酸シグナル伝達、細胞内Ca²⁺動員、およびPKC依存性の転写プログラムを誘導する。V1aシグナルは、血管平滑筋の緊張、血小板および内皮細胞の応答、さらにストレス反応性や社会行動を制御する神経内分泌回路に影響し、MAPK/ERKなどの下流経路とも統合される。AVPR1Aの発現量やシグナル伝達の変化は、血圧調節、血管収縮性の表現型、行動特性の関連研究などを含む、心血管および神経精神疾患領域の研究文脈で検討されてきた。これらの関連性により、AVPR1Aは細胞ベースモデルにおいて、GPCRのシグナル伝達とバソプレシン系の生物学を解明するための有用な標的となっている。

AVP Receptor V1a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AVPR1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AVP Receptor V1a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AVPR1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAVPR1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AVP Receptor V1aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAVPR1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAVP Receptor V1a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAVPR1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAVP Receptor V1a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。