Plásmido CRISPR de Activación (m) ATR: sc-434115-ACT

Mouse Atr codifica ATR, una cinasa de serina/treonina tipo PI3K que coordina la respuesta al daño del ADN durante el estrés replicativo. ATR se activa en ADN monocatenario recubierto por RPA y señaliza a través de efectores como CHK1 para estabilizar las horquillas de replicación detenidas, regular el disparo de los orígenes y reforzar los puntos de control intra-S y G2/M. Esta vía preserva la integridad del genoma al promover la reparación del ADN y controlar la progresión del ciclo celular, intersectando con procesos que incluyen la recombinación homóloga, la protección de las horquillas de replicación y la regulación de la apoptosis. La señalización de ATR desregulada se asocia con fenotipos de inestabilidad genómica y se estudia ampliamente en el contexto de la biología del cáncer y de trastornos del desarrollo vinculados a un control defectuoso de los puntos de control del daño del ADN.

ATR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Atr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Atr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Atr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Atr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATR en células tumorales con expresión de Atr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.