ATP6F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406611

Descripción general

ATP6V0B codifica ATP6F, una subunidad accesoria de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) que facilita la translocación de protones impulsada por ATP para acidificar endosomas, lisosomas y vesículas secretoras. La actividad de la V-ATPasa es fundamental para el tráfico endocítico, el reciclaje de receptores, la función del eje autofagia-lisosoma y el procesamiento de macromoléculas dependiente del pH, influyendo así en la detección de nutrientes y las respuestas celulares al estrés. La alteración de subunidades de la V-ATPasa puede perturbar la homeostasis de los orgánulos y se ha asociado con cambios en la dinámica vesicular y fenotipos relevantes para enfermedades en contextos como la neurodegeneración, la biología de infecciones y el metabolismo de células cancerosas, donde la acidificación de compartimentos suele estar remodelada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP6F (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATP6V0B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATP6V0B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATP6V0B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP6F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATP6V0B para la investigación de la señalización de ATP6F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATP6V0B críticos para la función de ATP6F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATP6V0B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP6F CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATP6F CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATP6V0B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP6F (h) y el plásmido HDR ATP6F (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATP6V0B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATP6V0B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.