ATP6E Double Nickase Plasmid (h): sc-404046-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATP6E Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATP6E Double-Nickase-Plasmid (h) und ATP6E Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP6V1E1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATP6E: sc-514143
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATP6E Double Nickase Plasmid (h) | sc-404046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP6E Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1E1 kodiert die E1‑Untereinheit (ATP6E) der Vakuolen‑H\+-ATPase (V‑ATPase) der peripheren V1‑Domäne, einer aus mehreren Untereinheiten aufgebauten rotierenden ATPase, die den Protonentransport antreibt und so Endosomen, Lysosomen und andere intrazelluläre Kompartimente ansäuert. Durch die Kontrolle des pH‑Werts in Organellen reguliert die V‑ATPase‑Aktivität die rezeptorvermittelte Endozytose, den lysosomalen Abbau, Autophagie, Antigenprozessierung und den vesikulären Transport, mit nachgelagerten Effekten auf Nährstoffsensorik und Signalwege, die an Membrantransport gekoppelt sind. Störungen der Untereinheitenzusammensetzung oder Funktion der V‑ATPase können die zelluläre Homöostase beeinträchtigen und wurden mit erblichen Störungen der Ansäuerung und neurodevelopmentalen Phänotypen sowie mit veränderter Proteostase und metabolischen Stressantworten in Verbindung gebracht. ATP6V1E1 ist daher ein nützlicher Genort, um die pH‑abhängige Regulation von Membrandynamik und Organellfunktion in menschlichen Zellen zu untersuchen.
ATP6E Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V1E1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V1E1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V1E1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V1E1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.