Plásmido Doble Nickase (m) ATP5B: sc-419247-NIC

Atp5b codifica la subunidad β de la ATP sintasa mitocondrial (ATP5B), un componente central del complejo V de la fosforilación oxidativa que cataliza la producción de ATP a partir de ADP y fosfato inorgánico. ATP5B sustenta la conversión de energía acoplada a protones a través de la membrana interna mitocondrial y contribuye al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, la capacidad respiratoria y la homeostasis bioenergética celular. La alteración de la función de la ATP sintasa puede modificar el manejo de especies reactivas de oxígeno, la señalización metabólica y las respuestas al estrés, vinculando las vías relacionadas con ATP5B con fenotipos de disfunción mitocondrial estudiados en la neurodegeneración, la enfermedad cardiometabólica y el metabolismo del cáncer. En modelos murinos, Atp5b se utiliza ampliamente para investigar cómo la producción mitocondrial de ATP limita la proliferación y diferenciación celular, así como la demanda energética específica de cada tejido.

ATP5B El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atp5b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atp5b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atp5b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atp5b alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.