Plásmido CRISPR de Activación (h) ATGL: sc-401711-ACT

PNPLA2 codifica la lipasa de triglicéridos del tejido adiposo (ATGL), la enzima limitante de la velocidad en la hidrólisis inicial del triacilglicérido almacenado en gotículas lipídicas citosólicas, generando diacilglicérido y ácidos grasos libres para la β‑oxidación mitocondrial y el equilibrio energético celular. La actividad de ATGL integra la dinámica de las gotículas lipídicas con redes de detección de nutrientes y señalización metabólica, incluidos programas transcripcionales impulsados por PPAR y la regulación lipolítica por cofactores como ABHD5/CGI‑58 y proteínas inhibidoras como G0S2. La expresión desregulada de PNPLA2 o la función de ATGL altera el recambio de triglicéridos y el flujo de ácidos grasos, contribuyendo a cambios en el almacenamiento de lípidos, estrés lipotóxico y fenotipos metabólicos observados en tejido adiposo, hígado, corazón y músculo esquelético. Como nodo central en el catabolismo de lípidos neutros, PNPLA2/ATGL se estudia ampliamente en modelos de trastornos de almacenamiento lipídico, vías relacionadas con la resistencia a la insulina y respuestas celulares a la privación de nutrientes.

ATGL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PNPLA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATGL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PNPLA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PNPLA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATGL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PNPLA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATGL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATGL en células tumorales con expresión de PNPLA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.