Particules Lentivirales d'Activation (m) ATF-6α: sc-432646-LAC

Le facteur de transcription activant 6 (ATF‑6α) est un senseur transmembranaire résidant dans le réticulum endoplasmique (RE) qui, lors d’un stress du RE, est clivé puis transloqué vers le noyau, où il déclenche des programmes transcriptionnels rétablissant la protéostasie. En tant que branche centrale de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), ATF‑6α coordonne l’expression des chaperonnes du RE, des composants de la dégradation associée au RE (ERAD) et le remodelage de la voie sécrétoire, tout en s’intégrant aux signalisations PERK et IRE1 pour réguler la survie cellulaire et l’adaptation. Dans les modèles murins, la modulation d’Atf6 est utilisée pour étudier la fonction des cellules sécrétoires, la gestion des stress oxydant et métabolique, ainsi que les interactions avec les voies de signalisation inflammatoires. Une dérégulation de la signalisation ATF6 a été associée au déséquilibre de la protéostasie observé dans des modèles de neurodégénérescence, de stress lié au diabète et de remodelage cardiaque, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’analyse mécanistique des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales ATF-6α (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Atf6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATF-6α (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Atf6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATF-6α. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Atf6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.