Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (h): sc-416821

Présentation

ATF5 code le facteur de transcription activateur 5 (ATF-5), un facteur de transcription bZIP qui coordonne l’adaptation cellulaire au stress en régulant des programmes d’expression génique impliqués dans la survie, la protéostasie et la différenciation. L’activité d’ATF-5 est couramment associée à la signalisation de la réponse intégrée au stress et au contrôle transcriptionnel en aval des voies dépendantes d’eIF2α/ATF4, avec des rôles dépendants du contexte dans la fonction mitochondriale et l’apoptose. Dans les cellules en prolifération, ATF-5 a été impliqué dans le maintien de l’état de lignée et dans le soutien du cycle cellulaire ainsi que du remodelage métabolique en conditions défavorables. Une expression dysrégulée d’ATF5 a été rapportée dans de multiples modèles de cancer et dans d’autres pathologies associées au stress, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation du stress et des réseaux transcriptionnels.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATF5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATF5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATF-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATF5 pour l'étude de la signalisation de ATF-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATF5 essentiels à la fonction de ATF-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATF5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATF-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATF-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATF5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATF-5 plasmide HDR (h) et le ATF-5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATF5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATF5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.