ASC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425141

概要

Trip4はASC-1をコードしており、ASC-1は転写共役因子として、配列特異的転写因子とRNAポリメラーゼIIの機構を結び付けるために、Activating Signal Cointegrator-1（ASC-1）複合体の一員として機能します。ASC-1は、核内受容体シグナル伝達に関連する遺伝子発現プログラムや、より広範な転写制御の調節に関与しており、分化、代謝、細胞ストレス応答に影響する過程も含まれます。マウスの系では、Trip4依存的な転写調節を用いて、共役因子がどのようにシグナル入力を統合し、クロマチンに関連した転写出力を形作るのかを解析します。ASC-1複合体機能の変化は、発生および神経筋関連の遺伝子プログラムの制御異常と関連づけられており、臨床的な転帰を示唆するものではないものの、疾患関連の転写ネットワークを研究するうえでの重要性を支持しています。

Asc-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrip4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trip4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trip4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Asc-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Asc-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trip4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Asc-1の機能に不可欠なTrip4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trip4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Asc-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAsc-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trip4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Asc-1 HDRプラスミド（m）および Asc-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrip4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrip4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。