Plasmide Double Nickase (h) ARRDC1: sc-407858-NIC

Le domaine arrestine contenant 1 (ARRDC1) est une protéine adaptatrice associée à la membrane plasmique, impliquée dans le trafic endosomal et la régulation, dépendante de l’ubiquitine, du renouvellement des protéines membranaires. ARRDC1 recrute des ligases E3 de la famille NEDD4 afin de favoriser l’ubiquitination des cargos et participe à la génération de microvésicules médiées par ARRDC1, ce qui la relie à la biogenèse des vésicules extracellulaires et à la communication intercellulaire. Par ces fonctions, ARRDC1 influence la dynamique de la signalisation des récepteurs, notamment les voies qui dépendent de l’internalisation et du recyclage des récepteurs membranaires. Un trafic vésiculaire et une signalisation par l’ubiquitine dérégulés impliquant ARRDC1 ont été étudiés dans des contextes tels que la signalisation des cellules cancéreuses et les processus de bourgeonnement viral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du remodelage membranaire.

ARRDC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARRDC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARRDC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARRDC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARRDC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.