ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419169

概要

Nr2f2 は核内受容体 ARP-1（COUP-TFII とも呼ばれる）をコードしており、ホルモン応答エレメントに結合して遺伝子プログラムを統合的に制御する、リガンド制御性の転写因子です。ARP-1 はレチノイン酸や他の核内受容体ネットワークからのシグナルを統合し、間葉系、内皮系、ストローマといった文脈においてクロマチン状態と転写出力を調節します。マウスモデルでは Nr2f2 活性の変化が細胞運命の規定、血管新生シグナル、組織パターニングに影響し、この経路が発生異常や血管生物学の制御破綻と関連することが示されています。Nr2f2 により制御される転写回路は、臨床的な転帰を示唆することなく、腫瘍微小環境、細胞移動、上皮‐間葉相互作用を形作る機構を、がん関連の実験系で研究するためにも用いられています。

ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr2f2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr2f2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr2f2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr2f2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARP-1の機能に不可欠なNr2f2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr2f2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr2f2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARP-1 HDRプラスミド（m）および ARP-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr2f2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr2f2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。