AROS-29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412385

Übersicht

TMEM161A kodiert AROS-29, ein multipassierendes Transmembranprotein, das an intrazellulären Membranen lokalisiert und vermutlich zur Membranorganisation sowie zur homöostatischen Signalübertragung in Epithel- und anderen somatischen Zelltypen beiträgt. Obwohl seine molekularen Partner bislang nicht vollständig definiert sind, wird TMEM161A mit Prozessen in Verbindung gebracht, die die Integrität von Organellen, zelluläre Stressantworten und die Regulation wachstumsbezogener Signalwege betreffen, welche mit Membrantransport und Proteostase verknüpft sind. Expressions- und genetische Assoziationsdaten haben TMEM161A mit Merkmalen in Zusammenhang gebracht, die die Epithelfunktion und die Anfälligkeit für Entzündungen beeinflussen, was eine weiterführende Untersuchung seiner Rolle bei der Gewebehomöostase stützt. Die Aufklärung der Biologie von AROS-29 kann helfen zu verstehen, wie membranverankerte Regulatoren die Signaltreue und Zellzustandsübergänge beeinflussen, die für komplexe Krankheitsmechanismen relevant sind.

Das AROS-29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMEM161A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMEM161A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMEM161A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AROS-29-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMEM161A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AROS-29-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMEM161A-Exone abzielen, die für die AROS-29-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMEM161A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AROS-29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AROS-29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMEM161A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AROS-29 HDR-Plasmid (h) und AROS-29 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMEM161A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMEM161A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.