ARL3 Double Nickase Plasmid (h): sc-416856-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARL3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARL3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ARL3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARL3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARL3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARL3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL3 kodiert die ADP-Ribosylierungsfaktor-ähnliche GTPase 3, eine kleine regulatorische GTPase, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen zyklisch wechselt, um den Transport in Zilien und Photorezeptoren zu koordinieren. In der primären Zilie wirkt ARL3 zusammen mit ARL13B und dessen GEF-Aktivität, um die Freisetzung und Zielsteuerung lipidierter Fracht über Carrier wie UNC119 und PDE6D zu kontrollieren; dadurch werden mikrotubuli-basierter Transport und die Zusammensetzung der Zilienmembran unterstützt. Über diese Prozesse trägt ARL3 zur Ziliogenese, Signaltransduktion und Kompartimentierung prenylierten und myristoylierten Proteinen bei. Eine Fehlregulation des ARL3-abhängigen Transports wird mit zilienassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter erbliche Netzhautdegeneration sowie weiter gefasste ciliopathiebezogene Mechanismen, die für die Neuroentwicklung und die sensorische Biologie relevant sind.
ARL3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARL3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARL3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARL3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARL3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.