ARK-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423193

Descripción general

Aurkc codifica la quinasa Aurora C (ARK-3), una quinasa de serina/treonina que regula la dinámica cromosómica y la división celular mediante la fosforilación de sustratos mitóticos implicados en la función del centrosoma, el ensamblaje del huso y la citocinesis. En las células germinales de ratón, la actividad de AURKC es especialmente importante para la progresión meiótica y la segregación cromosómica precisa, y se integra con redes regulatorias mitóticas centrales que coordinan las uniones cinetocoro–microtúbulo y el punto de control del huso. La desregulación de la señalización de las quinasas Aurora se asocia con aneuploidía e inestabilidad genómica, procesos que se estudian con frecuencia en biología reproductiva, genética del desarrollo y modelos del ciclo celular relevantes para el cáncer. Por lo tanto, la alteración de Aurkc proporciona un punto de entrada útil para desentrañar los mecanismos de mala segregación cromosómica y control del ciclo celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARK-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aurkc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aurkc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aurkc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARK-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aurkc para la investigación de la señalización de ARK-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aurkc críticos para la función de ARK-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aurkc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARK-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARK-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aurkc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARK-3 (m) y el plásmido HDR ARK-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aurkc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aurkc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.