Plásmido CRISPR de Activación (h) ARG-Vasopressin: sc-403139-ACT

AVP codifica la arginina vasopresina, una hormona peptídica neurohipofisaria sintetizada como preprohormona y procesada para regular el equilibrio hídrico sistémico, el tono vascular y la homeostasis neuroendocrina. A través de la señalización de AVPR2 en las células principales del conducto colector renal, la vasopresina promueve el tráfico dependiente de cAMP/PKA de la acuaporina-2 hacia la membrana apical, coordinando las respuestas antidiuréticas; las vías mediadas por AVPR1A contribuyen a la vasoconstricción y a una señalización más amplia en respuesta al estrés. La desregulación vinculada a AVP es relevante para trastornos de la osmorregulación y del control de la presión arterial, incluidos la diabetes insípida central y la antidiuresis inapropiada, y también se estudia en contextos neuropsiquiátricos y conductuales debido a los patrones de expresión en el SNC. Como gen hipotalámico estrechamente regulado, AVP constituye un modelo para estudiar la transcripción dependiente de estímulos, el procesamiento peptídico y la biología de la vía secretora.

AVP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AVP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AVP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AVP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AVP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AVP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AVP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AVP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AVP en células tumorales con expresión de AVP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.