Plasmide CRISPR/Cas9 KO APRT (m): sc-419171

Présentation

Le gène murin *Aprt* code l’adénine phosphoribosyltransférase (APRT), une enzyme cytosolique clé de la voie de sauvetage des purines, qui convertit l’adénine en AMP en utilisant le pyrophosphate de phosphoribosyle (PRPP). En recyclant les bases puriques, l’APRT contribue à l’équilibre des pools de nucléotides, à la synthèse de l’ADN/ARN et au métabolisme énergétique cellulaire, en particulier lorsque la synthèse de novo des purines est limitée. L’inactivation d’APRT perturbe l’homéostasie des purines et peut favoriser l’accumulation de métabolites dérivés de l’adénine, reliant ainsi l’activité d’APRT aux réponses au stress métabolique. *Aprt* est donc pertinent pour étudier les mécanismes reliant le métabolisme des nucléotides au maintien du génome, au stress oxydant et à la susceptibilité tissulaire aux déséquilibres métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO APRT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aprt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aprt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aprt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine APRT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aprt pour l'étude de la signalisation de APRT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aprt essentiels à la fonction de APRT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aprt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le APRT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le APRT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aprt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le APRT plasmide HDR (m) et le APRT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aprt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aprt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.