APRT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410689

Übersicht

APRT (Adenin-Phosphoribosyltransferase) ist eine zytosolische Phosphoribosyltransferase, die mithilfe von Phosphoribosylpyrophosphat Adenin im Salvage‑Stoffwechsel zu Adenosinmonophosphat umsetzt und damit die Nukleotidhomöostase sowie den Purinstoffwechsel unterstützt. Diese Aktivität verknüpft den Purin‑Salvage‑Weg mit übergeordneten zellulären Prozessen wie DNA-/RNA‑Synthese, Energiebilanz und Replikationsstress‑Antworten, die von ausreichenden Nukleotidpools abhängen. Eine veränderte APRT‑Funktion stört den Purinfluss und kann die Abhängigkeit hin zur de‑novo‑Purinsynthese verschieben, wodurch ein gut handhabbares System zur Untersuchung metabolischer Kompensation und von Nukleotidungleichgewichten entsteht. Ein APRT‑Mangel wurde mit Störungen im Purinstoffwechsel und damit verbundenen Nierenpathologien in Zusammenhang gebracht, was APRT zu einem nützlichen Modell für die Analyse metabolismusgekoppelter zellulärer Phänotypen macht.

Das APRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des APRT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des APRT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von APRT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die APRT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von APRT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der APRT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf APRT-Exone abzielen, die für die APRT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere APRT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom APRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom APRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des APRT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das APRT HDR-Plasmid (h) und APRT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von APRT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten APRT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.