Plásmido CRISPR de Activación (h) APRIL: sc-403150-ACT

TNFSF13 codifica APRIL (ligando inductor de proliferación), una citocina de la superfamilia del TNF producida predominantemente por células mieloides que favorece la supervivencia de las células B, la recombinación de cambio de clase y el mantenimiento de las células plasmáticas. APRIL señaliza principalmente a través de los receptores TACI (TNFRSF13B) y BCMA (TNFRSF17), activando programas de NF-κB y MAPK que coordinan las respuestas de anticuerpos y la homeostasis inmunitaria. Mediante la regulación de la producción de inmunoglobulinas y la longevidad de las células plasmáticas, la actividad desregulada de APRIL se asocia con activación anómala de células B y señalización inflamatoria observadas en distintos contextos de enfermedades autoinmunes y linfoproliferativas. Por lo tanto, la biología de la vía de APRIL es relevante para estudios mecanísticos de la inmunidad humoral, las interacciones tumor–sistema inmune y las redes de señalización impulsadas por citocinas.

APRIL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNFSF13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

APRIL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNFSF13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNFSF13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de APRIL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNFSF13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de APRIL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía APRIL en células tumorales con expresión de TNFSF13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.