apolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419167

概要

マウスApoeはアポリポタンパク質E（apoE）をコードしており、apoEは分泌型でリポタンパク質に結合するタンパク質として、血漿および中枢神経系におけるコレステロールとトリグリセリドの輸送を制御します。apoEはLDL受容体ファミリーのメンバーとの相互作用を介して、受容体依存的な脂質の取り込みと再分配を仲介し、リポタンパク質粒子のクリアランス、膜恒常性、ならびに細胞からのコレステロール排出（エフラックス）経路を形作ります。脳内では、apoEはグリア細胞における脂質トラフィッキング、シナプス維持、神経炎症シグナル伝達に関与し、脂質代謝とニューロンのレジリエンス（抵抗性）を結び付けます。Apoe機能の改変は脂質異常症や動脈硬化の機序をモデル化するために広く用いられており、さらにアミロイド沈着、ミクログリア応答、神経変性過程の実験研究においても中心的な役割を担います。

apolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるApoe遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Apoe内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Apoeのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、apolipoprotein E/apoEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、apolipoprotein E/apoEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Apoe欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• apolipoprotein E/apoEの機能に不可欠なApoeエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Apoeゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• apolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびapolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Apoe遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  apolipoprotein E/apoE HDRプラスミド（m）および apolipoprotein E/apoE HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはApoeホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のApoe標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。